造血細(xì)胞超低溫保存箱

  造血細(xì)胞的保存始于20世紀(jì)20年代末80年代初，短期保存是在4度下進(jìn)行。在這種溫度下，離體細(xì)胞仍然保持著新陳代謝，通常只能保存48～72 h。而超低溫(零下80～零下196度)時，細(xì)胞內(nèi)新陳代謝減慢乃至停止，則可以較長時間保存。細(xì)胞的超低溫保存在降溫和復(fù)溫過程中，其內(nèi)外環(huán)境會發(fā)生一系列改變，會造成冷凍損傷，而加人細(xì)胞保護(hù)劑可減輕這種損傷，細(xì)胞復(fù)溫后可以維持初始形狀和生理功能。細(xì)胞保護(hù)劑一般分為高分子的非穿透性保 護(hù)劑 (如HES、白蛋白等)和低分子的穿透性保護(hù)劑 (如 DMSO、甘油等)。造血細(xì)胞的保存初期多用10%DMSO為保護(hù)劑的程控降溫液氮液態(tài)保存，保存的骨髓細(xì)胞15年后造血細(xì)胞活力良好。程控降溫是基于造血細(xì)胞為有核細(xì)胞，在細(xì)胞溫度進(jìn)人液氮內(nèi)溫度前，需以1～2℃／rain降溫速率降溫至-60度或-80度。這種降溫方法需特殊程控降溫儀，不僅操作費(fèi)時，且成本大，特別是對小樣本的保存是很不經(jīng)濟(jì)的，因此限制了它的使用。我們在20世紀(jì)80年代，采用10%的DMSO為保護(hù)劑，-80度低溫冰箱降溫保存骨髓 。

  研究表明，從保護(hù)劑的角度看，5%DMSO-6 %HES優(yōu)于10%DMSO。這一效果在用低溫保存箱?降溫與保存中更能得到充分體現(xiàn)。這可能與DM-SO對細(xì)胞有毒性作用有關(guān)。有學(xué)者報(bào)道，即使在4度下，骨髓細(xì)胞接觸5 rain的10%DMSO后，CFU-GM將損失25%，30min后損失可超過75%。我們的結(jié)果顯示，這種損傷現(xiàn)象沒有那么嚴(yán)重，但5%DMSG-6%HES明顯減輕了這種損傷。

  低溫保存箱降溫液氮保存和低溫保存箱降溫并保存，與自控程序降溫液氮保存比，在1年內(nèi)造血細(xì)胞保存效果均良好。本研究20例患者的外周血干細(xì)胞在1年內(nèi)均已進(jìn)行了移植，全部重建造血功能 。另有文獻(xiàn)報(bào)道，如果造血細(xì)胞需要長期保存，選用低溫保存箱降溫時，則以液氮保存為好，也說明-80度的低溫保存箱降溫能達(dá)到慢速降溫的效果。細(xì)胞在這種溫度下不宜長期存放，是否說明細(xì)胞在此溫度下仍保持一定程度的新陳代謝，值得進(jìn)一步研究。 細(xì)胞的低溫保存是在液氮液態(tài)下保存還是在液氮?dú)鈶B(tài)下保存仍有爭論，過去多是推薦液氮液態(tài)保存，現(xiàn)主張?jiān)谝旱獨(dú)鈶B(tài)下保存。細(xì)胞復(fù)溫后，細(xì)胞內(nèi)保護(hù)劑也應(yīng)立即稀釋或去除，如果細(xì)胞是給患者治療用，細(xì)胞復(fù)溫后應(yīng)立即應(yīng)用，在 30rain內(nèi)輸人體內(nèi)。

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