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超低溫冰箱在微生物冷凍保存的應用

點擊次數(shù):4164    更新時間:2017-07-21

超低溫冰箱在微生物冷凍保存的應用

    將微生物處于冷凍狀態(tài),使其代謝作用停止以達到保藏的目的。大多數(shù)微生物都能通過冷凍進行保存,細胞體積大者要比小者對低溫更敏感,而無細胞壁者則比有細胞壁者敏感。其原因與低溫會使細胞內(nèi)的水分形成冰晶,從而引起細胞,尤其是細胞膜的損傷。進行冷凍時,適當采取速凍的方法,可因產(chǎn)生的冰晶小而減少對細胞的損傷。當從低溫下移出并開始升溫時,冰晶又會長大,故快速升溫也可減少對細胞的損傷。冷凍時的介質(zhì)對細胞的損傷也有顯著的影響。例如,0.5 mol / L左右的甘油或二甲亞楓可透入細胞,并通過降低強烈的脫水作用而保護細胞;大分子物質(zhì)如糊精、血清蛋白、脫脂牛奶或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)雖不能透入細胞,但可通過與細胞表面結合的方式而防止細胞膜受凍傷。因此,在采用冷凍法保藏菌種時,一般應加入各種保護劑以提高培養(yǎng)物的存活率。
  一般來說,保藏溫度越低,保藏效果越好。在常用的冷凍保藏方法中,液氮保藏可達到-196℃。因此,從適用的微生物范圍、存活期限、性狀的穩(wěn)定性等方面來看,該方法在迄今使用的各種微生物保藏方法中是較理想的一種。但液氮保藏需使用器具,一般僅適合一些專業(yè)保藏機構采用。與此相應,超低溫冰箱保藏使用更為普遍。例如在各種基因工程手冊中,一般都推薦在-70℃超低溫冰箱中保存菌株或細胞的某些特殊生理狀態(tài)(添加甘油做保護劑),例如經(jīng)誘導建立了感受態(tài)的細胞。在沒有超溫冰箱的條件下,也可利用-20~30℃的普通冰箱保存菌種。但應注意加有保護劑的細胞混合物的共融點處在這個溫度范圍內(nèi),常會由于冰箱可能產(chǎn)生的微小溫度變化引起培養(yǎng)物的反復融化和再結晶,而對菌體形成強烈的損傷。因此采用普通冰箱冷凍保存菌種的效果往往遠低于超低溫冰箱,應注意經(jīng)常檢查保藏物的存活情況,隨時轉種。

 

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